Ląstelių pasėjimas reiškia ląstelių padalijimą į mažesnes dalis, persodinimą į kitą kultūros talpyklą ir vėl kultivavimą. Ląstelių kultūros kolbos yra dažniausiai naudojamos pernešimo metu. Taigi, kokie yra konkretūs ląstelių praėjimo žingsniai?
1.Išimkite ląstelių kultūros kolbą iš inkubatoriaus, alkoholio purškimo kolba ant kolbos paviršiaus papurkškite 75 procentų alkoholio ir perkelkite ant itin švaraus stendo.
2. Atidarykite ląstelių kultūros kolbos dangtelį, švelniai išsiurbkite seną terpę, su Pasteur pipete įpilkite atitinkamą kiekį PBS buferinio tirpalo, išplaukite 1-2 kartus ir išmeskite PBS buferinį tirpalą.
3. Ląstelių kultūros kolbą pipete galima papildyti 1-2ml tripsino, o „kryžius“ sukratyti, kad visiskai susisiektų su tripsinu ir ląstelėmis.
4. Ląstelių kultūros kolbą, kurioje yra tripsino, perkelkite į apversto mikroskopo stadiją, stebėkite ląstelių virškinimą po mikroskopu ir, kai ląstelės suapvalės ir nukris didelis skaičius, pasiruoškite nutraukti virškinimą. Išpurkškite 75 procentų alkoholio ant kolbos paviršiaus ir perkelkite ant itin švaraus stendo.
5. Ląstelių kultūros kolba papildoma tokiu pat kiekiu serumo turinčios terpės ir virškinimas nutraukiamas. Pipetė visiškai išpučiama ir sumušama, kad ląstelės visiškai nukristų.
6. Sumaišytą skystį ląstelių kultūros kolboje perkelkite į centrifugos mėgintuvėlį, subalansuokite ir centrifuguokite apie 5 minutes.
7. Centrifugavus ląstelių kultūros kolbą, centrifugos mėgintuvėlio paviršių apipurkškite alkoholio purškimo kolba, perkelkite į itin švarų stendą, atidarykite dangtį ir supilkite supernatantą į atliekų skysčio cilindrą.
8. Į ląstelių kultūros kolbą įpilkite atitinkamą tūrį serumo turinčios terpės ir švelniai plakite pipete arba Pasteur pipete, kad paruoštumėte ląstelių suspensiją.
9. Padalinkite ląstelių suspensiją į 2 (ar daugiau) sterilias ir švarias ląstelių kultūros kolbas, įpilkite atitinkamą terpės kiekį ir uždarykite dangtį.
10. Padalytas ląstelių kultūros kolbas uždėkite ant apversto mikroskopo scenos ir stebėkite ląstelių situaciją. Ląstelių skaičius turėtų būti garantuotas. Per mažai ląstelių turės įtakos jų augimui.
11. Padarykite etiketę ant ląstelių kultūros kolbos kolbos, nurodydami perėjimo laiką, ląstelės tipą, operatorių ir kitą informaciją. Prieš dėdami į inkubatorių, ant kolbos paviršiaus papurkškite alkoholio, sutvarkykite operacinį stalą, nuvalykite itin švarų stalą 75 procentų alkoholiu, išvalykite skystį ir šiukšles.
Aukščiau pateiktas specifinis ląstelių perėjimo procesas naudojant ląstelių kultūros kolbas. Operuojant reikia atkreipti dėmesį į sterilius drabužius, sterilias pirštines ir kaukes, o visa operacija turi būti atliekama aseptiškai, kad būtų išvengta ląstelių užteršimo.
Citrato kraujo mėgintuvėliai, edta separatoriaus vamzdeliai, nefiltruoti pipetės antgaliai, gelio pipetės antgalių gamintojas